中文名称:人结肠腺癌细胞HCT-8绿色荧光标记BALB/cA-nu小鼠模型
英文名称:HCT-8-eGFP
类型:结肠腺癌动物模型
分级:NA
用途:用于结肠腺癌研究。
研制单位:中国医学科学院医学实验动物研究所
保存单位:中国医学科学院医学实验动物研究所
结肠腺癌是结肠腺上皮来源的常见消化道恶性肿瘤,属于结肠癌多种病理类型中的一种。
结肠腺癌起病隐匿,早期仅见粪便隐血阳性,逐步为血便、痢疾样脓血便,里急后重。病人常有不同程度的腹痛,常有糜烂、坏死和继发性感染,左侧结肠癌常并发肠梗阻,时有腹部绞痛,伴有腹胀、肠鸣音亢进等。腹部肿块多见于右腹部,是右侧结肠癌的表现之一,提示已到中晚期,肿块表面可有结节感 ,一般可以推动,但到肿瘤晚期时则固定,合并感染时可有压痛。结肠癌的患者可出现进行性贫血,低热,进行性消瘦,恶液质,肝肿大、浮肿、结肠腺癌黄疸和腹水等。
BALB/cA-nu小鼠,胸腺缺失,为第11对染色体隐性遗传,T细胞免疫缺陷,B细胞正常,具有较高的NK细胞活力,无接触敏感性,无移植排斥反应。
转染获得稳定表达GFP的细胞株,选择其中高表达的克隆株扩大培养。经过多次传代表达水平稳定,标记细胞的形态、生长方式、生长速度及致瘤能力等与未转染细胞无明显差异。
图1.绿色荧光标记的HCT-8细胞系
模型制作采用BALB/cA-nu裸小鼠,鼠龄5周,体重15—18 g,BALB/cA-nu裸小鼠在实验室无特定病原体饲养间饲养。收集处于生长对数期的细胞,稀释至5×106cells/mL。取200μL细胞悬液进行皮下接种。
分别在接种的7、14、21、28和35 d观察肿瘤的生长情况。在接种的第7天就可以观察到肿瘤发光,通过肿瘤组织发出的荧光的光子数可以确定肿瘤的大小,随着观察天数的增加,肿瘤的体积和发光强度增加,且具有很好的相关性(图1)。以肿瘤细胞发射的光子数对小鼠荷瘤时间作图,得到绿色荧光蛋白标记肿瘤细胞在裸鼠体内的生长曲线(图2)。
图1 皮下接种HCT-8-GFP肿瘤生长影像
图2 皮下接种绿色荧光HCT-8小鼠肿瘤生长曲线
该小动物模型饲养在清洁级动物中,微生物处于监控状态,动物房有相应的保护措施,小鼠不会出现逃逸,不会对外界环境造成影响。